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恒远文献:白细胞介素6水平在大鼠深静脉血栓形成中的变化

点击次数:91    发布时间:2020/1/17 10:55:45

上 传 者: 上海恒远生物科技有限公司

上传时间:2020/1/17 10:55:45

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资料简介:

白细胞介素 6 水平在大鼠深静脉血栓形成中的变化
屈碧辉,何涛,胡敏,王迪乐
(湖北省武汉市中心医院 血管外科,湖北 武汉 430014)
 
摘 要 目的:探讨白细胞介素 6(IL-6)在深静脉血栓形成(DVT)中的变化与作用。方法:60 只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组(n=10)与模型组(n=50),模型组大鼠采用双侧股静脉钳夹联合后肢石膏制动诱导后肢 DVT,并分别在造模后 2、5、10、15、25 h 各处死 10 只大鼠取材,观察股静脉血栓形成情况;用 real-time PCR 检测股静脉内皮组织 IL-6 mRNA 含量;ELISA 法检测血清 IL-6、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)和纤溶酶原激活物(tPA)水平。结果:模型组大鼠造模后 2 h 未见血栓形成,但从 5 h 开始出现血栓形成,并随着时间的延长,血栓形成逐渐增多。模型组大鼠股静脉内皮组织中的 IL-6 mRNA 水平在造模后逐渐升高,于 15 h 达高峰;模型组大鼠血清 IL-6、PAI 含量变化情况与 IL-6 mRNA 变化一致,但血清 tPA 浓度变化则与前两者相反。模型组以上各指标在各时间点与假手术组间的差异均有统计学意义(均 P<0.05)。结论:在大鼠 DVT 过程中 IL-6 水平升高,其可能通过促进 PAI 的产生、抑制 tPA 的活化来促进血栓的形成。 [中国普通外科杂志, 2014, 23(6):765-768]关键词 静脉血栓形成;白细胞介素 6;纤溶酶原激活物抑制物;组织型纤溶酶原激活物;大鼠中图分类号:R654.3静脉血栓栓 塞(venous thromboembolism,VTE)是临床三大血栓性疾病(心肌梗死,缺血性脑卒中和静脉血栓),也是临床上*常见的静脉疾病 [1]。深静脉血 栓(deep vein hrombosis,DVT)是常见的静脉血栓栓塞,是常见的创伤或骨科手术术后并发症,尤其对于严重创伤和恢复缓慢的老年患者而言,长期卧床容易导致下肢深静脉瘀滞,形成 DVT[2-4]。深静脉血栓的早期预防和治疗非常重要。有研究 [5-7] 表明,炎症与血栓形成之间存在着密切的联系,一方面炎症促进高凝状态,另一方面血栓形成中的物质也可引起炎症。白细胞介素 6(IL-6)具有多种生物学活性,是炎症反应的重要因子 [8-9]。本研究利用大鼠后肢深静脉血栓模型,利用 real-time PCR和 ELISA 检测静脉内皮组织和血清中 IL-6 及相关因子的含量变化,探讨 IL-6 在血栓形成中的作用,为其临床预防和早期诊断奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
实验动物:雄性清洁级 SD 大鼠,8~12 周龄、体质量(235 ± 35)g,60 只;主要试剂:反转录试剂盒购自 TAKATA 公司;Real-time 试剂盒购自全式金生物技术有限公司;IL-6、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)、纤溶酶原激活 物(tPA)ELISA
试剂盒购自上海恒远生物技术发展有限公司
1.2 方法
1.2.1 大鼠创伤性 DVT 模型的建立和分组  将50 只清洁级雄性 SD 大鼠采用蚊式钳钳夹双侧股静脉联合石膏制动双下肢构建大鼠 DVT 模型(模型组),10 只 SD 大鼠切开大腿皮肤后缝合创口作假手术处理(假手术组)。模型组分别在造模后 2、5、10、15、25 h 各处死 10 只大鼠取材,用于各指标的检测。1.2.2 RNA 提 取 和 real-time PCR 检测组织中IL-6 含量 将钳夹部位的股静脉(约 2 cm 长)连同周围组织一同取下,用生理盐水漂洗,去除血管内的血栓和杂质,显微镜下分离静脉内皮组织,裂解组织,一步法提取大鼠深静脉内皮组织总 RNA,测定浓度与质量。取 1 μg 作为模板,按照 PrimeScriptTM RT reagent Kit 说明书反转录得到细胞 cDNA。使用 TransStart®Top Green qPCR SuperMix 试剂盒进行实时定量 PCR 实验,所用仪器为 ABI StepOne Real time PCR system。用于IL-6 实时定量 PCR 的引物序列 为:5'-GAG AAA AGA GTT GTG CAA TGG C-3' 和 5'-ACT AGG TTT GCC GAG TAG ACC-3'。
1.2.3 大鼠血清制备 大鼠腹腔内注射 1% 戊巴比妥钠麻醉,摘取眼球法取血 8 mL。3 000 r/min 离心 10 min,将上清转移至新的无 RNA 酶的 EP 管中,12 000 r/min 离心 2 min,收集上清,-80 ℃保存待用。
1.2.4 ELISA 检测血清中 IL-6、PAI、tPA 含量按照 ELISA 试剂盒说明书所述,制成标准曲线,将血清用标本稀释液按照 1:1 稀释后加入反应孔内,震荡混匀,37 ℃温育 1 h,洗涤液洗涤,加入生物素化抗体工作液,37 ℃温育 1 h 后洗涤,分别加入
底物 A、B 液,震荡混匀,37 ℃避光显色 15 min,迅速加入终止液,450 nm 波长处测定 OD 值
1.3 统计学处理
全部结果均采用 SPSS 13.0 软件分析。数据以均数 ± 标准差(x±s)表示。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用 q 检验,P<0.05 为差异有统计学意义。
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