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恒远产品文献:IL-37 抑制 IL-18 在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义的探讨

点击次数:120    发布时间:2019/11/15 10:02:34

上 传 者: 上海恒远生物科技有限公司

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资料简介:

IL-37 抑制 IL-18 在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义的探讨①
孙云晖 王一新 马雪梅 章 婷 赵艳景 ( 佳木斯大学附属*医院,佳木斯 154003)

[摘 要] 目的: 初步研究博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中 IL-37、IL-18 的表达水平,探讨其在 PF 发生、发展中的表达及意义。方法: 将 45 只清洁级 Wistar 大鼠按随机数字表法分为健康对照组( N 组) 、博来霉素组( B 组) 、地塞米松治疗组( D组) ,每组大鼠各 15 只,B 组及 D 组大鼠给予气管内注射博来霉素 4 mg /kg 制作肺纤维化模型,N 组给予相同体积生理盐水作为对照,D 组大鼠于肺纤维化造模基础上第 2 天每日腹腔注射地塞米 3mg /kg,N、B 组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠分别于造模后第 7、14、28 天处死,HE 染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸( HYP) 、IL-37 含量,RT-PCR 法测定肺组织中 IL-18mRNA 表达量。结果: ①HE 染色显示B、D 组大鼠肺组织病理学改变由肺泡炎症逐渐发展为纤维化,B、D 组 HYP 含量随时间推移逐渐升高,以第 28 天为著( P<0. 05) ; ②B、D 组 IL-37、IL-18mRNA 表达于第 7 天升高至*点,后逐渐降低,至第 28 天均高于 N 组,差异有统计学意义( P<0. 05) ; ③D 组 IL-37、IL-18mRNA 表达在同一时间均低于 B 组( P<0. 05) 。结论: IL-37、IL-18 在大鼠肺纤维化发病早期起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展。
[关键词] 肺纤维化; IL-37; IL-18; 博来霉素肺纤维化( Pulmonary fibrosis,PF) 是一种原因不明的慢性间质性肺部疾病,其病理主要表现为弥漫性肺泡炎、肺泡结构紊乱、细胞外基质( Extracell�ular matrix,ECM) 大量沉积等[1]。有研究报道肺纤维化是由肺组织受到损伤后,修复调节失控及重建异常引起的病理改变,是一系列细胞因子、炎性因子、生长因子等通过多条信号转导通路共同作用的结果[2]。IL-37 是 IL-1 家族新发现的细胞因子,有研究报道 IL-37 可通过负反馈调节机制调节先天性及固有免疫应答,抑制促炎细胞因子、趋化因子等的产生和对基因转录调节[3]。IL-18 通过调控多种细·1464· 中国免疫学杂志 2017 年第 33 卷胞信号转导通路,促进炎症发生、细胞分化、细胞因子生成等作用[4]。本实验建立博来霉素致大鼠肺纤维化模型,探讨 IL-37 /IL-18 轴在其发病中的作用及意义,可为阐明这类疾病发病机制及治疗提供新思路。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 实验动物 健康清洁级 Wistar 大鼠 45 只( 雌雄各半) ,6 周龄,体重 180 ~ 220 g,由哈尔滨医科大学实验动物学部提供[许可证号: SCXK( 黑)2013-001],随机分为健康对照组( N 组) 、博来霉素组( B 组) 和地塞米松治疗组( D 组) ,每组各 15 只大鼠,于佳木斯大学动物中心饲养。
1. 1. 2 实验材料与试剂 注射用盐酸博来霉素BLM( 海正辉瑞制药有限公司提供) ; HE 染色试剂( 湖北锦源医疗科技有限公司提供) ; Nikon eclipse50i 显微镜( 北京中仪光科科技发展有限公司提供) ; IL-37 大鼠 ELISA 试剂盒( 上海恒远生物科技有限公司提供) ;
1. 2 方法
1. 2. 1 模型建立及标本留取 B、D 组以 4 mg /kg剂量博来霉素一次性快速推注至气管内,N 组给予等体积生理盐水。D 组大鼠于肺纤维化造模基础上第 2 日开始每日腹腔注射地塞米松 3 mg /kg; N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠造模后分别于第 7、14、28 天处死,取右上肺组织置于10% 甲醛溶液中固定、脱水、石蜡包埋、常规切片,HE 染色,观察肺组织结构的病理形态学变化; 从左肺组织上留取 50 mg 肺组织,制备组织匀浆,用于HYP、IL-37 检 测; 取 右 肺 组 织 100 mg,放 入Eppendorf 管内,-80℃ 保存,用于检测 IL-18mRNA表达水平。
1. 2. 2 ELISA 方法 碱水解法测定肺组织 HYP 含量,ELISA 法检测肺组织 IL-37 表达水平,均严格按照试剂盒说明书进行操作。
1. 2. 3 RT-PCR 检测肺组织 IL-18mRNA 表达水平提取肺组织总 RNA,反转录为 cDNA。目的基因IL-18mRNA 上 游 引 物: 5'-GAGGACTGGCTGTGACCCTATC-3',下 游 引 物 5'-CCTGGCACACGTTTCTGAAA-3',扩增片段 151 bp。内参照β-actinmRNA 上 游 引 物: 5'-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3',下游引物 5'-TTTAATGTCACGCACGATTTC-3',扩增片段 150 bp。PCR 反应条件严格按照试剂盒说明书进行。
1. 3 统计学方法 采用 SPSS 软件进行统计分析实验结果采用 x±s 表示,多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较应用 LSD-t 检验,以 P <0. 05 为差异有统计学意义。
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