又是一个周五,时光飞逝,还记得上个星期的这个时候,我们为朋友们分享的是一个用TRIzol索取RNA的方法步骤。今天我们要给朋友们说的也是一个实验过程,其相关于酶的细胞。下面我们就来看一看上海恒远分享整理:酶的细胞化学实验技术过程。
在一定条件下,使组织细胞内的酶与其底物相互作用,形成初级反应产物,再用捕捉剂在酶的作用部位进行捕捉,使其在显微镜下可见。
反应的过程如图下所示:
我们通过图中式可见,酶细胞化学反应实际上由两项反应组成。前面的酶反应相当于细胞内自然条件下发生的酶促反应,后面的捕捉反应则是为了使酶反应可见而 人为造成的。捕捉反应的目的是使酶反应产物形成在显微镜下可见的*终反应产物,即*终反应产物在光镜下具有鲜明颜色,在电镜下具有高电子密度。捕捉反应主要 有金属盐沉淀法、色素形成和嗜锇物质生成法。
在实验中我们要准备好样品的制备:
酶细胞化学的一个重要问题是既要保存好细胞内酶的活性,又要保存好细胞的结构,因此选择适当的固定剂种类、浓度、固定的方式和时间是细胞化学技 术的一个关键问题。光镜样品固定多选用中性福尔马林或多聚甲醛,4℃、24小时,常规的石蜡包埋切片可以满足相当一部分酶的细胞化学要求;电镜样品固定通 常用0.5~2%戊二醛或4%多聚甲醛,4℃、2小时,再切成5~100μm的厚片用于细胞化学反应,反应后经常规的锇酸后固定,脱水、包埋、超薄切片、 至电镜下观察。冷冻切片能较大限度地保存酶的活性,因此是光、电镜酶细胞化学技术中常用的方法。
酶细胞化学反应实际上就是孵育反应的过程,孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉剂,保证孵育液pH 的缓冲液以及有关的添加剂等。孵育的温度和时间可根据不同的酶和组织通过实验而确定。电镜酶细胞化学的样品在孵育反应后需经锇酸后固定、梯度乙醇脱水、环 氧树脂包埋和超薄切片,至电镜下观察。
基本实验过程式:
酶的细胞化学实验技术过程到这里就结束了,您在实验的过程中也要注意一些细节问题。这里是上海恒远生物,我公司的产品质量可靠,进口、过程,专业代理。您在实验我公司产品的同时,有任何问题都可以来电咨询我公司业务员,我们会时间为您解决,不论是产品还是实验技术。