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阅读次数:1175 发布时间:2013/7/11 9:58:25
恒远发布抗磷脂抗体检测方法
检测APLA*敏感试验是1983年介绍的ACLA的检测,后来这种方法得到不断改进,血清、血浆均可用于分析。该方法即为酶联免疫吸附实验(ELISA):用纯心磷脂的无水乙醇溶液(50/11)包被聚苯乙烯反应板,4~C过夜;常规方法洗涤后,用10%的BSA封闭;加l:50稀释的待测血清,37~C孵育30rain;洗板后,再分别加入HRP标记的抗人γ(1:1 500)、抗α(1:1 000)、抗μ(1;8 000)链的F(ab)2片段,37℃30min然后,OPD显色,加终止液。492nm波长测吸光度值。结果以正常对照组平均值±2S为正常上下限。
这种以心磷脂作为靶抗原的ELISA方法,由于交叉反应,ACLA可能会与其他磷脂结合。
操作中应注意以下事项:避免脱补体作用(加热血清至56℃),否则会引起假阳性结果;反复冻融样本也会导致ACLA结合力下降;微孔板也很重要。并且,在包被心磷脂同一板上,还可通过比较加和不加β2-GPI两微孔问的结合活性,区别β2-GPI依赖与不依赖的ACLA。
流式细胞术亦被应用于ACLA的检测,可同时检测APLA同种型。
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