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阅读次数：1339 发布时间：2012/9/19 8:33:45
一、组织抽提：1. 取组织块50-100㎎用液氮在研钵中研磨成粉末2. 移入玻璃匀浆器加入1ml Trizol 抽打匀浆3. 移入1.5ml新离心管用5 ml针头抽打4. 冰上孵育5分钟5. 离心12,000g 4℃ 5分钟取上清液移入1.5ml新离心管6. 加0.2 ml氯仿，震荡，冰上孵育5分钟7. 离心<12,000g 4℃ 10分钟取上层液相移入1.5ml新离心管8. 加0.5 ml异丙醇，震荡，冰上孵育5分钟9. 离心<12,000g 4℃ 5分钟弃去上清液10. 加入1 ml 75%乙醇，震荡11. 离心<7,500g 4℃ 5分钟弃去上清液12. 室温下使之变透明13. 加入DEPC处理水10μl －－35μl 溶解RNA（可保存在液氮或低温冰箱）14. 走RNA变性电泳观察18s，28s条带，分光光度计检测260/280吸光度比值，计算RNA浓度 二、RT反应体系（步）：约20分钟
RNA 抽提物 5μl Radome引物 2μl RNA sin 0.5μl
| RNA sin | 0.5μl |
| 10mM dNTP | 1μl |
| 5×RT 缓冲液 | 4μl |
| 25mM MgCl2 | 4μl |
| AMV 逆转录酶 | 3μl |
| 25mM MgCl2 | 2μl |
| 10×PCR 缓冲液 | 5μl |
| 10mM dNTP | 1μl |
| 上下游引物10pmol/μl | 2.5μl×2 |
| CDNA模板 | 2.5μl |
| ddH2O | 34μl |
| Taq酶 | 0.5μl |
| 轻质石蜡油 | 50μl |
| | 100μl |
| 25mM MgCl2 | 3μl |
| 10×PCR 缓冲液 | 5μl |
| 10mM dNTP | 1μl |
| 上下游引物10pmol/μl | 2.5μl×2 |
| CDNA模板 | 5μl |
| ddH2O | 30μl |
| Taq酶 | 1μl |
| 轻质石蜡油 | 50μl |
| | 100μl |
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