Western blot实验原理
Western免疫印迹(Western blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基本的表达产物,可通过融合部分的抗原检测。
与Soutern或Northern杂交方式类似,但Western blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
样本运输条件及保存条件:
组织样本
1.组织样本应立即放置-20℃。
2.运输过程采用液氮,干冰,市内运输可选用冰袋。
3.样本量不低于100 mg。
4.请告知组织种属和类型,如肝脏、脾脏等。
细胞样本
1.有严格时间节点的实验需客户自行裂解样本,提取蛋白,采用干冰运输。
2.客户离心收集好的细胞、悬浮细胞、贴壁细胞都需用冰袋维持4℃运输,不可使用干冰和液氮。
3.所提供细胞量不低于106。
特殊样本
1.全血采用冰袋维持4℃运输,严禁用干冰和液氮运输,血清和血浆可采用液氮,干冰,冰袋运输。
2.植物组织应采用干冰或液氮运输,防止植物褐化,氧化。
3.客户处理好已经变性的样本,液氮,干冰,冰袋均可运输。
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