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点击次数:3208 发布时间:2019/11/8 8:54:05
经过自主研发和兼并重组不断扩展企业产品线,逐步发展为试剂的专业制造商和电子商务集成供应商,成为全球试剂职业发展的者。在开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全。
一:细胞与试剂方面:
1.细胞(单层细胞,镜检合适)
2.培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等合适细胞有要求的培养液)
3.灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)
4.7.5%NaHC03 溶液
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5.0.25%胰蛋白酶
6.PBS 洗液。
二;试验小用具方面:
1.小方瓶(100m1)
2.克氏瓶
3.胶塞
4.吸管(10ml、1m1)
5.细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)
6.C02 孵箱
7.超净台
8.倒置显微镜
9.4℃、- 20℃冰箱
三:细胞传代的操作过程
1.挑选细胞:镜检细胞,挑选成长状态杰出,细胞界限清晰,具有立体感,形状好无污染、无反常及可疑病变细胞。
2.制造细胞培养液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,参加灭活小牛血清10m1,庆大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。
3.消化细胞:先用PBS 洗液冲刷细胞外表1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内参加0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使消化液彻底覆盖细胞外表。
4.至细胞彻底脱落到胰酶中:每瓶参加10m1 细胞培养液吹打涣散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再参加10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。
5.加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片(由细胞接种浓度决定)。
6.填写传代记录。
原创作者:上海恒远生物科技有限公司