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七步成：恒远实验基因合成过程方法

点击次数：6979 发布时间：2014/2/21 10:36:16

在前面的文章中我们还说到春雨的到来，这节气雨水后，上海市的天气反而转晴了。今天又是一个周五，本周的*后一个工作日，这一天一天过的真快。看到题目您就知道，今天的文章还是实验，那么下面就来看吧，只需七步成：恒远实验基因合成过程方法。

1、将两种寡核苷酸各1 μg加入微量离心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×测序酶缓冲液。70℃加热5 min，然后在合适的退火温度下保温5 min，取2 μl 留待以后的分析。

2、加2 μl 4种dNTP混合液和10 U测序酶，30℃温育30 min。

3、70℃ 10 min 灭活DNA聚合酶，取2 μl 留待以后的分析。

4、加10×限制性内切酶反应缓冲液，加水和20~100 U 的适合于克隆的限制性内切酶至100 μl。适当的温度下消化2 h 以上。

5、酚抽提，加100 μl 4 mol/l 乙酸铵和400 μl 的无水乙醇，-70℃沉淀15 min，离心5 min，沉淀重悬于100 μl TE缓冲液，用乙醇再沉淀一次，用95%乙醇洗涤沉淀，干燥，20 μl TE缓冲液溶解，取2 μl 用于以后的分析。

6.、用筛分型琼脂糖凝胶电泳分析确证原材料、延伸产物和酶切产物，估计延伸的寡核苷酸的量，再用适当的载体亚克隆。

7、对几个合适的亚克隆测序。

以上为本次文章的中心实验步骤啦，虽然雨水停了，但是现在购买我公司产品的话还是会送雨伞哦！刚刚开学，在活动期间早点为实验而准备吧。上海恒远真的非常感谢您的支持！

原创作者：上海恒远生物科技有限公司

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